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蛋白A免疫吸附(五)

作者:admin发布时间:2019-01-02 16:59

      (二1基园工程蛋白A的研究进展与热点

       国外从20世纪80年代开始利用  工程技术克隆和表达重组蛋白 A.主要表达原镜是大肠杆南1也有研究者使用枯草杆南表达系统,  系统表达水平可达到1g/L,但在该系统中蛋白A基因必调格合人宿主的基因用才能稳定存在“。在国内”研究人员克降表达了含5个lG结合结构域的重组蛋自A.男个研究小组证明了他们获得的市组近白A比天然出白A具有更好的地G吸附性能“与此同时,在分析蛋白入序外、结构和功能关系的基础上,通过基因克牌和重组技术进行分子改置,以获取功能更强稳定性更子或依设计意图而发t功能改变的重组置白。

      也是其因工程蛋自人A研究的热点之.除义结构域外。进白A包含5个具有IgG吸附能力的结构城.每个IgG结合结构境均具有独立的lgt识制与结合位点0其中B结构城的抗体吸附能力很可能是最强的。并且蛋白A所有结构城的折叠相互镇立彼此之间没有相互影响。蛋白A的这些结构特点为研究者提供了对其进行分子改造的切人点和思路即构建个包含若干 ↑B结构域的申联体其抗体吸附活性将远比天然蛋白人高。

      日本的研究者合成B结构域的编码序列。通过平端连接法构建了分别包含2个和4个日结构域的串联体。并在大肠杆岗中获得了商效表达研究结果还显示这些半联体可以和IG形成其沉旋,并具有和天热蛋白A相似的二级结构。瑞典的研究人员则构建了分别含有2个.5个和10个日结构域的中联体。并日发现,合有5个和10个B结构城的中联体在所使用的表达系统中并不稳定,出结构域显示出比E结构城更道的抗律吸附能力”。

      在该研究中,由于使用了识别序列为非国文结构的限制性内切酶AccI,解决了中联体克隆设计中中联单体的连接方向的一一致性问题。回内的研究 者用相同的思路构建了青有3个B结构城的中联体,产物纯度在90%以上间。

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